Προπαρασκευαστική φάση: Σε αυτό το αρχικό στάδιο, ένα μόριο σακχάρου 6 άνθρακα (συνήθως γλυκόζη) φωσφορυλιώνεται δύο φορές για να σχηματίσει 1,6-διφωσφορική φρουκτόζη. Αυτή η διαδικασία απαιτεί την είσοδο 2 μορίων ATP και χρησιμοποιεί τα ένζυμα εξοκινάση και φωσφοφρουκτοκινάση.
Φάση διάσπασης: Κατά τη διάρκεια αυτού του σταδίου, η φρουκτόζη-1,6-διφωσφορική διασπάται σε δύο σάκχαρα 3 άνθρακα:3-φωσφορική γλυκεραλδεΰδη (GAP) και φωσφορική διυδροξυακετόνη (DHAP). Αυτά τα 2 μόρια είναι αλληλομετατρέψιμα και και τα δύο μπορούν να προχωρήσουν περαιτέρω στο μονοπάτι.
Φάση αποπληρωμής: Αυτό το τελικό στάδιο περιλαμβάνει τη μετατροπή του GAP και του DHAP σε πυροσταφυλικό, δημιουργώντας ATP και NADH στη διαδικασία. Αυτό το στάδιο αποτελείται από διάφορα ενζυματικά στάδια, συμπεριλαμβανομένων των αντιδράσεων φωσφορυλίωσης και οξείδωσης σε επίπεδο υποστρώματος. Τελικά, παράγονται 2 μόρια πυροσταφυλικού μαζί με συνολικά 4 μόρια ATP και 2 NADH για κάθε μόριο γλυκόζης που εισέρχεται στη γλυκόλυση.